实验干货丨原来Western Blot条带可以这样清晰！
我是Ross，初入科研的小白一枚，因为相信21世纪是生物的世纪，我毅然决然选择加入生命科学的领域，探索生物的奥秘。
最近，师兄让我做实验，并安利了1个视频。
他说看完视频，我就能从小白脱胎换骨。
Ross
这是HUABIO录制的关于Western Blot这项生物技术的教学视频。
Western Blot 简称WB，是检测目的蛋白表达的常见手段。
8分钟，HUABIO教你快速掌握WB！
为了让自己做起实验更加得心应手，我绘制了一个流程总览。
WB流程总览
是不是看着没有很困难？但当我实操的时候，发现看似简单的WB，不仅流程复杂，就算我按部就班，有时候结果还是不尽人意。
Ross
常见实验结果
Western Blot
Ross
我没有在你实验室安装监控哦，但这是不是你的日常呢？其实我也是这样，我咨询了一下HUABIO的技术支持，她们给出了很多解决方案：
Western Blot
实验常见结果分析
01
无条带或条带弱
样本中无目的蛋白或目的蛋白含量过低。
设置高表达目的蛋白的阳性对照；增加蛋白上样量。
一抗二抗不匹配（如兔来源一抗搭配抗鼠二抗）。
更换二抗，选择与一抗匹配的二抗。
二抗稀释液含有叠氮化钠。
叠氮化钠抑制HRP活性。二抗稀释液避免叠氮化钠成分。
重复利用抗体导致效价降低。
重新制备工作液，建议现配现用，不建议稀释后长时间保存。
02
高背景，多条带
蛋白样品降解。
添加蛋白酶抑制剂；制备新鲜样本。
封闭物选取不当，封闭液中与其他蛋白发生抗体的交叉反应。
磷酸化抗体或含有生物素标记的抗体建议使用5%BSA进行封闭。
一抗非特异性结合。
可降低一抗浓度。
03
实际检测分子量与理论不一致
蛋白质存在翻译后修饰、翻译后切割等修饰，改变了蛋白质分子量大小。
查阅文献进行生物信息学分析，获得蛋白系列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小。
04
条带拖尾
最可能的原因是一抗浓度太高，作用时间太长或者蛋白量过大。
根据情况调整蛋白量，同时降低一抗的浓度，缩短一抗的时间。
以上就是HUABIO根据我提出的问题作出的分析与建议。
Ross
大家在实验过程中都遇到过哪些问题呢？
愿意一起分享你的经历，大家一起互帮互助吗？
Ross
活动说明
活动时间：
2021.12.17-12.23 9:30
参与方式：
本推文评论区留言你在WB实验中最常遇到的问题，大家有经验的可以相互解决。
获奖方式：
根据留言的点赞排名进行奖品发放。（评论截止时间2021.12.23 9:30）
留言点赞数排名前1-5名送出京东卡50元1张。
留言点赞数排名前6-10名送出28cm小羊驼*1
热心群众奖：帮助他人解决问题数量最多的前5名“热心群众”，可额外获得神秘大礼包一份。
本活动仅限生命科学领域科研人员参与。
请于活动结束后注意公众号信息，兑奖时间截止2021.12.30，逾期因个人原因客服未能联系上，视为自动放弃领奖。
本活动解释权归华安生物所有。
●文献|HUABIO助力长距离神经损伤再生的新型腔内填充材料研究
华安生物
杭州华安生物技术有限公司成立于2007年3月，总部位于中国杭州，是一家从事抗体研发与生产的国家高新技术企业。公司致力于为全球的科研工作者和工业客户提供高品质的抗体试剂及抗体定制服务，生产体系通过ISO9001国际质量体系认证。公司的产品线包括兔单抗、小鼠单抗、兔多抗、羊驼抗体、二抗、蛋白/多肽、抗体检测用相关试剂等12000余种。2015年，公司开始专注于高通量重组兔单克隆抗体的研发与产业化生产。同时，公司也为客户提供定制抗体的开发、纯化和筛选服务。
迄今为止，公司已为各个领域完成10000个定制科研抗体项目，为工业级客户开发IVD诊断用肿瘤标志物系列抗体原料和食品安全检测相关抗体百余种，为制药公司提供包括PD1和PD-L1热门靶点在内的早期抗体药物筛选十余种。
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